Dokhotel.ru

Как подсчитывается титр антител 2019

Количественное определение антител

Наиболее часто используемым методом количественной оценки активности антител является определение их титра. Этой процедуре предшествует приготовление разведений (обычно двукратных) сыворотки. Далее каждое из них исследуется с соответствующими антиген позитивными эритроцитами в том методе, котором антитела проявляют свое действие. Процедура имеет ряд серьезных недостатков. Во первых, несмотря на тщательные усилия, происходит избыточный перенос сыворотки при приготовлении разведений. Во вторых, даже если разведения сыворотки приготовлены с большой точностью, различные константы антител одной и той же специфичности способны существенно влиять на результаты. N.C. Hughes-Jones показал, что даже если два вида антител присутствуют в сыворотке в одинаковых количествах, но обладают различными константами, различающимися на 10минут, то титр одного вида антител может превышать в 10 раз этот показатель для других. В третьих, результаты титрования, выполненного вручную, учитываются с известной долей субъективизма (также как и другие при выполнении проб на совместимость, фенотипирование) в то время как в данном случае главным является необходимость объективно отличить положительные результаты от отрицательных.

В результате существования этих трудностей были разработаны более точные и элегантные методы определения активности антител. Они включали прямую метку антител с использованием изотопов йода, использование анти-IgG, меченных йодом применение системы AutoAnalyzer. Все эти системы помогли разрешить многие проблемы, обусловленные различиями констант связывания различных видов антител и иммунопреципитации. Используя AutoAnalyzer, можно судить о концентрации антител в количественном отношении в нанаграммах на литр. Используя известные стандарты, стало возможным весьма точно оценить содержание антител в различных сыворотках.

Однако, все эти достижения по-прежнему остаются вне внимания большинства иммуногематологов – последние предпочитают по-старому определять активность антител методом титрования.

1.В каждую из 10 пробирок поместите 1 объем разводителя (обычный изотонический раствор)

2.В первую пробирку с разводителем добавьте равный объем титруемой сыворотки.

3.Перемешайте содержимое пробирки и перенесите один объем из нее в следующую пробирку с объемом разводителя.

4.Повторите описанную процедуру включая пробирку 10.

5.Теперь в пробирках приготовлены двукратные разведения от 1:2 до 1:1024.

6.Перенесите по 2 капли из пробирок с приготовленными разведениями по 2 капли в соответствующие пробирки, в которых приготовлены сухие капли эритроцитов. Может быть также выполнена проба с неразведенной сывороткой в отдельной пробирке.

7.Проводите серию тестов с приготовленными разведениями сыворотки.

Важные замечания по технике титрования

1.После переноса объема сыворотки или ее разведения в следующую пробирку замените наконечник пипетки-дозатора. Использование одной и той же пипетки или наконечника приведет к излишнему переносу титруемой сыворотки и значительному завышению значений титра антител.

2.Чем больше объемы приготовленных разведений, тем меньше погрешность при титровании, уровень ошибки обратно пропорционален объему используемой пипетки.

3.Антитела нестабильны в разведенном состоянии. После приготовления разведений титрование должно быть выполнено сразу.

4.Если требуется приготовить разведение 1:1024, то лучше приготовить разведение 1:1000 путем смешивания в отдельной пробирке 0,1 мл сыворотки с 99,9 мл изотонического раствора. Точность будет выше, если смешать 1 мл с 999 мл изотонического раствора.

5.Если титрование проводится с энзимированными эритроцитами (одноэтапный метод), в качестве разводителя следует использовать 50% сыворотку АВ группы, поскольку в больших разведениях сыворотки содержание белка очень незначительно – это может привести к гемолизу эритроцитов.

6.Если для исследования имеются небольшие объемы сыворотки, реакции по определению титра проводят прямо в приготовленных разведениях. При этом следует помнить, что такое титрование сопряжено с ошибками и погрешностями, которые отмечены в п.2 выше.

7.Поскольку результаты титрования не являются легко воспроизводимыми , следует использовать серийные методы исследований (описываются в главе 26, посвященной пренатальным серологическим тестам).

8.Moore и соавт. Рекомендуют использовать в качестве разводителя при титровании 1% раствор бычьего альбумина.

Точка конца титра

Правильный способ сообщить о результатах титрования – использовать величину, обратную наибольшему разведению, в котором наблюдается положительная реакция на 1+. Таким образом, о сыворотке, реагирующей неразведенной на 4+ , в разведении 1:2 на 3+, 2+ в разведении 1:4, 1+ в разведении 1:8, затем слабее, чем на 1+ в разведениях 1:16 и 1:32 и показывающая отрицательный результат в разведении 1:64 можно сказать, что она имеет титр 8 (не “1:8” – это не титр, а разведение!).Реакции с силой слабее 1+ обычно не принимаются во внимание при определении титра.

Система счета (score)

Существует также дополнительный способ характеристики активности антител, основанный на оценке в баллах силы положительных реакций в каждом разведении. Впервые предложенная система подсчета была десятибалльной, в ней троекратно положительная реакция оценивалась на 10 баллов, реакции силой в 2+ на 8 баллов, 1+ – на 5 баллов. Однако, в большинстве лабораторий максимально выраженные положительные реакции оценивают на 4+ и в этой связи применяют 12-балльную шкалу при подсчете показателя score. Для определения указанного показателя производят оценку в баллах всех положительных реакций, полученных при титровании сыворотки. Определение score часто полезно, когда с одной и той же сывороткой исследуют разные образцы эритроцитов или наоборот, оценивают антитела различных сывороток с одним и тем же образцом эритроцитов. Показатель score отражает не только титр, но также и авидность антител. Например, антитела двух различных сывороток могут иметь одинаковый титр 256, но при этом те из них, которые реагируют во всех разведениях на 1+ будут иметь невысокий показатель score, в то время как этот параметр будет существенно выше у другого образца антител, если при титровании получены положительные реакции выраженностью в 3+ или 4+. Очень часто различия в авидности антител либо экспрессии антигенов лучше демонстрируют показатели score, нежели значения титров. Система подсчета score, которой мы пользовались на протяжении долгих лет приведена далее в таблице.

Читать еще:  Антиретровирусная терапия и алкоголь

Учитесь читать результаты титрования

Для того, чтобы не перестараться при учете показателей титра некоторые исследователи предпочитают вести учет результатов не с наименьших, а с наибольших разведений. Такой подход (наряду со сменой наконечников пипетки для титрования) позволяет избежать субъективизма при учете результатов титрования.

Тем, кто не верит в сложность процедуры титрования предлагаем поупражняться в этом следующим образом. Пусть Ваш коллега проведет титрование, перепутает порядок, в котором были установлены пробирки а Вам будет предложено оценить результаты и попытаться расставить их в правильной первоначальной последовательности – попробуйте, и Вы убедитесь, что это не так просто, как может показаться на первый взгляд!

Система подсчета score

Сила реакций Синонимы при учете реакции Оценка в баллах score
Полная
3,5 слабая 4 или сильная 3
2,5 слабая 3 или сильная 2
1,5 слабая 2 или сильная 1
0,5 слабая 1 или±
следы

Эффект прозоны

Сравнительно редко антитела при титровании слабо или вовсе не реагируют будучи неразведенными или в начальных разведениях, а в разведениях 1:16 или 1:32 наблюдаются самые сильные реакции. Этот феномен известен как эффект прозоны и обусловлен избыточным количеством антител, которые способны заблокировать все антигенные детерминанты таким образом, что агглютинации не наступает. В действительности это одно из проявлений перенасыщения антигена антителами.

Этот феномен может сослужить плохую службу в тех ситуациях, когда исследуется сыворотка крови больного с сильной посттрансфузионной гемолитической реакцией. Если при исследовании получены отрицательные результаты, то рекомендуется их повторить с сывороткой, разведенной в 5 или 10 раз.

Феномен прозоны при титрованиях в аниглобулиновом тесте может иметь несколько причин, например конкуренцию между полными и неполными антителами за антигенные сайты, частичная элюция антител при отмывании или выраженная элюция антител перед добавлением антиглобулиновой сыворотки, что приводит к ее последующей нейтрализации. Наиболее часто он наблюдается при работе с анти-IgG компонентом антиглобулиновой сыворотки (см. более подробно главу 4).

Некоторые возможные результаты титрования и их интерпретация

Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (в том числе антирезусные), титр

Это выявление антител к специфическому белку, находящемуся на поверхности эритроцитов, – резус-фактору. Данные антитела являются одной из основных причин гемолитической болезни новорождённых.

Титр антирезусных антител.

Anti Rh, Rh Typing.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Резус-фактор (Rh) передается по наследству, это белок на поверхности эритроцитов. Те люди, у которых он есть (а это большинство, около 85 %), называются резус-положительными. Однако у некоторых, резус-отрицательных, этот белок отсутствует. Отрицательный резус никак не влияет на здоровье самого человека. Однако у матери и ребенка, которого она вынашивает, могут возникнуть проблемы, если у них разные резус-факторы или если у матери развиваются антитела, которые реагируют с факторами клеток крови ребенка. Наиболее распространенный пример: женщина с негативным резус-фактором (Rh-) беременна ребенком с положительным резус-фактором (Rh+). Иммунная система этой женщины может выработать антитела против резус-положительного фактора крови ее ребенка. Несмотря на это первенец довольно редко бывает больным, потому что материнский иммунитет не вступает в контакт с кровью ребенка до самых родов. Однако антитела, выработанные при первой беременности, могут свободно проникать через плаценту при следующих беременностях и таким образом создавать проблемы резус-положительному ребенку.

Читать еще:  Флуимуцил ИТ антибиотик для ингаляций

Для уменьшения вероятности того, что у матери Rh- выработаются антитела на кровь ребенка Rh+, ей иногда назначают инъекции анти-D-гамма-глобулина за 28-34 недели до родов, а также в первое время после рождения резус-положительного ребенка. Могут потребоваться и дополнительные инъекции во время беременности, если возникнет подозрение на то, что кровь матери контактировала с кровью плода Rh+ (например, при пункции плодного пузыря или при травмах брюшной полости). Инъекция антитела очищает кровь ребенка от присутствующих антигенов и таким образом предотвращает реакцию на них материнской иммунной системы.

Для чего используется исследование?

Анализ на антирезусные антитела применяется главным образом для обнаружения антител на резус-фактор. Резус-отрицательная мать и резус-положительный отец могут зачать Rh+ ребенка, при этом есть вероятность, что некоторые эритроциты крови ребенка попадут в кровяное русло матери во время беременности и родов. В ответ на чужеродные эритроциты Rh+ организм матери вырабатывает антирезусные антитела. Они представляют собой угрозу для будущих детей этой матери. Каждая женщина до наступления беременности либо во время нее должна сдать анализ на резус-фактор. Он поможет определить, является ли ее кровь резус-отрицательной, а также выяснить, приобрела ли резус-отрицательная женщина антитела против эритроцитов Rh+. Беременная женщина, организм которой еще не образовал антирезусные антитела, для предотвращения их появления может воспользоваться инъекциями иммуноглобулина. Резус-отрицательной женщине при беременности следует пройти дополнительное лечение иммуноглобулинами сразу после любой ситуации, когда кровь плода могла попасть в ее кровяное русло. Анализ на антирезусные антитела помогает выявлять эти процессы и вовремя назначать и корректировать лечение для предотвращения резус-конфликта.

Когда назначается исследование?

  • При необходимости назначить лечение иммуноглобулиновыми инъекциями беременной женщине с отрицательным резус-фактором.
  • В случае когда эритроциты плода могли попасть в кровяное русло беременной с резус-отрицательным фактором, если у нее были выкидыши, внематочная беременность, искусственные роды или аборты, пункция плодного пузыря, травмы живота, искусственное изменение положения плода.
  • Анализ может быть назначен женщине с отрицательным резус-фактором, родившей ребенка с положительным резусом и прошедшей лечение инъекциями иммуноглобулинов, для того чтобы определить, есть ли у него антитела против эритроцитов Rh+.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • Антитела обнаружены, есть вероятность резус-конфликта.
  • Антитела не обнаружены, вероятность резус-конфликта низкая.

Правильно проведенное лечение анти-D-гамма-глобулинами препятствует образованию антирезусных антител практически у всех беременных женщин с отрицательным резус-фактором. Однако такая профилактика не действует, если у женщины уже образовались антирезусные антитела.

Анализ на антитела и титры при резус-конфликте во время беременности – лечение и профилактика

Время на чтение: 6 минут

Наличие отрицательного резус-фактора у будущей мамы может стать серьезной проблемой, если будущий папа – резус-положительный: дитя может унаследовать папин резус-фактор, и возможный результат такого наследства – резус-конфликт, который потенциально опасен для малыша и мамы. Выработка антител начинается в мамином организме к середине 1-го триместра, именно в этом периоде возможно проявление резус-конфликта.

Как проводят диагностику у резус-отрицательных мамочек, и возможно ли лечение резус-конфликта в процессе вынашивания малыша?

Содержание статьи:

Диагностика резус-конфликта при беременности – когда и как сдают анализы на титры и классы антител?

О количестве антител в маминой крови врач узнает с помощью тестов, называемых «титрами». Показатели теста демонстрируют – имели ли место «встречи» маминого организма с «инородными телами», за которые организм резус-отрицательной мамочки принимает и резус-положительный плод.

Также данный тест необходим для оценки тяжести развития гемолитической болезни плода, в случае ее возникновения.

Определение титров осуществляется через анализ крови, который берут без какой-либо специальной подготовки женщины, натощак.

Также в диагностику могут входить следующие методы:

  • Амниоцентез. Или забор околоплодных вод, осуществляемый непосредственно из плодного пузыря с обязательным контролем УЗИ. С помощью процедуры определяется группа крови будущего малыша, плотность вод, а также титр антител мамы к резусу. Высокая оптическая плотность исследуемых вод может говорить о распаде эритроцитов малыша, и в этом случае специалисты решают – как именно вести далее беременность.
  • Кордоцентез . Процедура предполагает забор крови из пуповинной вены при контроле датчика УЗИ. Метод диагностики позволяет определить титр антител к резусу, наличие анемии у плода, резус и группу крови будущего малыша, а также уровень билирубина. Если результате исследования подтверждается факт отрицательного резуса у плода, то от дальнейшего наблюдения «в динамике» маму освобождают (при отрицательном резусе малыша никогда не возникает резус-конфликта).
  • УЗИ. На этой процедуре осуществляется оценка размеров органов малыша, наличие отечности и/или свободной жидкости в полостях, а также толщина плаценты и пуповинной вены. В соответствии с состоянием будущей мамы, УЗИ могут проводить столь часто, как того требует ситуация – вплоть до ежедневного режима.
  • Допплерометрия . Этот метод позволяет оценить показатели работы сердца, уровень скорости потока крови в пуповине и сосудах малыша, и проч.
  • Кардиотокография . С помощью метода определяют имеется ли гипоксия плода, а также осуществляют оценку реактивности сердечнососудистой системы малыша.
Читать еще:  Спреи для носа с антибиотиком – список с названиями 2019

Стоит отметить, что процедуры вроде кордоцентеза и амниоцентеза сами по себе способны привести к повышению титров антител.

Когда проводят анализы на антитела?

  1. При 1-й беременности и при отсутствии выкидышей/абортов: раз в месяц с 18-й по 30-ю неделю, дважды в месяц с 30-й по 36-ю неделю, и далее раз в неделю до самых родов.
  2. При 2-й беременности:с 7-8-й недели беременности. При выявлении титров не более 1 к 4 данный анализ повторяется раз в месяц, а при факте роста титра – в 2-3 раза чаще.

Нормой при «конфликтной» беременности специалисты считают титр с показателем до 1:4.

К критическим же показателям относят титры 1:64 и выше.

Лечение резус-конфликта матери и плода

Если до 28-й недели в мамином организме антитела не были обнаружены совсем, или же в значении, не превышающем 1:4, то риск развития резус-конфликта никуда не девается – антитела могут проявить себя и позже, и в довольно большом количестве.

Поэтому даже при минимальном риске резус-конфликта специалисты перестраховываются и в профилактических целях вводят будущей маме на 28-й неделе беременности антирезусный иммуноглобулин D, чтобы женский организм перестал вырабатывать антитела, способные разрушить клетки крови малыша.

Вакцина считается безопасной и не наносящей вреда маме и малышу.

Повторно укол делают уже после родов, чтобы избежать осложнений при последующих беременностях.

  • При превышении скорости кровотока отметки 80-100 врачи назначают экстренное кесарево сечение во избежание гибели малыша.
  • При росте количества антител и развитии гемолитической болезни проводят лечение, заключающееся во внутриутробном переливании крови. При отсутствии такой возможности решается вопрос о досрочных родах: сформированные легкие плода позволяют провести стимуляцию родов.
  • Очищение материнской крови от антител (плазмаферез). Метод применяется во 2-й половине беременности.
  • Гемосорбция. Вариант, при котором с помощью специального аппарата мамину кровь пропускают через фильтры для удаления из нее токсических веществ и очищения, а потом возвращают (очищенную) обратно в сосудистое русло.
  • После 24-й недели беременности врачи могут назначить серию уколов, способствующих более быстрому созреванию легких ребенка для самостоятельного дыхания после экстренных родов.
  • После родов малышу назначают переливание крови, фототерапию или плазмаферез в соответствии с его состоянием.

Обычно резус-отрицательных мамочек из высокой группы риска (прим. – при высоких показателях антител, при обнаружении титра на раннем сроке, при наличии первой беременности с резус-конфликтом) наблюдают в ЖК лишь до 20-й недели, после чего отправляют в стационар на лечение.

Несмотря на обилие современных методов защиты плода от маминых антител, самым эффективным остается родоразрешение.

Что касается внутриутробного переливания крови, его осуществляют 2-мя способами:

  1. Введение крови при контроле УЗИ в живот плода с последующим всасыванием ее в кровоток ребенка.
  2. Введение крови через прокол длинной иглой в пуповинную вену.

Профилактика резус-конфликта матери и плода — как избежать резус-конфликта?

В наши дни для профилактики резус-конфликта используется антирезусный иммуноглобулин D, существующий под разными названиями и известный своей эффективностью.

Профилактические действия осуществляют на сроке в 28 недель при отсутствии антител в маминой крови, учитывая, что риск контакта ее антител с эритроцитами малыша повышается именно в этот период.

В случае кровотечений при беременности, использовании таких методов, как кордо- или же амниоцентез, введение иммуноглобулина повторяют во избежание резус-сенсибилизации при последующей беременности.

Профилактику данным методом осуществляют, независимо от исхода беременности. Причем, доза препарата рассчитывается в соответствии с кровопотерей.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector